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歸一化法、內標法、外標法、標準加入法 如何靈活選擇

2015-12-21 17:04:35

 色譜分析分三個階段:儀器調試、色譜操作條件選擇、定性定量分析。色譜分析的重要作用之一就是對樣品定量。


色譜法定量的依據如下圖:

因此,要準確定量,首先要準確測出峰面積與定量校正因子。

 

峰高也可作為定量指標

 

 

對于一定的樣品,如果操作條件保持不變,在一定的進樣量范圍內,半高峰寬是不變的,峰高可直接代表組分的濃度,由峰高代替面積計算。方法快速、簡便,適用于固定不變的常規分析。與使用面積定量法比較,對于出峰早的組分,由于半高峰寬很小,相對測量誤差大,這時用峰高定量更準確。對于出峰晚、峰較寬的組分,用峰面積定量更準確。

標準加入法可以看作是內標法和外標法的結合。具體操作是取等量樣品若干份,加入不同濃度的待測組分的標準溶液進行色譜分析,以加入的標準溶液的濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標繪制工作曲線。樣品中待測組分的濃度即為工作曲線在橫坐標延長線上的交點到坐標原點的距離。由于待測組分以及加入的標準溶液處在相同的樣品基體中,因此,這種方法可以消除基體干擾。

 

但是,由于對每一個樣品都要配制三個以上的、含樣品溶液和標準溶液的混合溶液,因此,這種方法不適于大批樣品的分析。

 

經驗之談


應用外標法能夠滿足要求,首選外標法,畢竟外標法簡單而省事。對于精密度要求比較高、

結果準確度要求高時用內標法還是必要的。

 

在制作內標標準曲線時應注意什么?


在制作標準曲線時,不僅要注明色譜條件(如固定相、柱溫、載氣流速等),還應注明進樣體積和內標物濃度。在制作內標標準曲線時,各點并不完全落在直線上,此時應求出面積比和重量比的比值與其平均位的標準偏差,在使用過程中應定期進行單點校正,若所得值與平均值的偏差小于2,曲線仍可使用,若大于2,則應重作曲線,如果曲線在較短時期內即產生變動,則不宜使用內標法定量。


對于微量分析,比如農藥和獸藥殘留的分析、環境分析等,根據不同的限量標準要求對于精密度的要求也比常量分析的要求要寬松的多,RSD有時可以允許達到10%甚至更高,這時可能外標法有更大的應用空間。


單從精密度方面去考慮,排除其它成本和效率的因素,內標法優于外標法。


 

內標與外標都是定量的一種方法,各有優缺點,做不同的分析,面對不同的要求,再加上分析成本分析效率等等問題來選擇定量方法,簡單而有效進行定量分析法才是最重要的。

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